Yotsuba kembali menjalani berbagai aktivitas kecil bersama Ayah (Koiwai), keluarga Ayase, dan teman-teman di sekitarnya. Dengan cara pandangnya yang unik, Yotsuba sering menafsirkan hal-hal biasa secara berlebihan atau keliru, sehingga memunculkan situasi lucu dan menggemaskan. Hal-hal sederhana seperti bermain, berbincang, atau membantu orang dewasa berubah menjadi petualangan seru versi Yotsuba.